Щелочные экстракты

Методика
в основном заключается в гидролизе связанных с глюкуроновой кислотой стероидов глюкуронидазой,
экстракции, предварительном выделении стероидов в тонком слое окиси алюминия,
переводе прегнандиола, прегнантриола и прегнантриолона в триметилсилиловые
эфиры и определении полученных производных методом газо-жидкостной
хроматографии. Используя такого рода методику, авторы добились определения этих
стероидных соединений в количестве до 20 мкг в суточной моче. Указанная
методика была применена при обследовании здоровых лиц, беременных женщин и
больных некоторыми эндокринными заболеваниями.

Для
определения бралась моча в количестве от 10 до 30 мл. Определение прегнандиола
требовало ферментативного гидролиза в течение 24 часов, определение
прегнантриола и прегнантриолона — гидролиза в течение 2 суток.

Экстракция
мочи (после гидролиза) производилась трижды 35 мл дихлорметана. Эмульгирование
устранялось центрифугированием в течение 10 минут при 2000 об/мин. Охлажденный
дихлорметановый экстракт дважды промывался 25 мл 1 н. раствора гидроокиси
натрия, а потом дистиллированной водой до нейтральной реакции. Растворитель
удалялся высушиванием в вакууме над безводным сульфатом натрия. Перед
нанесением стероидного экстракта на тонкий слой адсорбента стеооиды
растворялись в   хлористый метилен .

Хроматографирование
производилось в системах растворителей этанол-бензол 1 :6 и этанол-бензол 1 :8.

Первая
система растворителей обеспечивает отделение 17-кетостероидов от метаболитов
прогестерона, последующее хроматографирование во второй системе растворителей
позволяет отделить прегнандиол от прегнантриола и прегнантриолона.

Образование триметилсилиловых эфиров производилось одним из наиболее
часто употребляемых способов: добавлением 1 мл гексаметилдисилазана и 0,2 мл
триметилхлорсилана к стероидному экстракту, растворенному в 1 мл тетрагидрофурана.

Оставить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *