Хроматографирование

Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа. В случае необходимости количественных
измерений использовали ультрафиолетовую часть спектра для освещения стандартов,
закрывая ту часть пластинки, где располагались разделенные стероидные
экстракты.

С
пластинки пятна последовательно элюировались, элюат центрифугировался,
упаривался и часть его вводилась в хроматограф для количественного определения.

При
выполнении этой части настоящей работы использовался Панхроматограф фирмы W. G,
Англия. Разделение производилось на колонках длиной 120-200 см и внутренним
диаметром 4 мм из боросиликатного стекла, наполненных 1-5% жидких фаз и,
которые были нанесены на твердый носитель силанизированные хромосорб  или газхром.  Детектирование осуществлялось аргоновым
ионизационным детектором. Напряжение, подаваемое на детектор, колебалось в
зависимости от характера и целей исследования в пределах 750-1750 в,
чувствительность ампера. Газ-носитель — аргон. Давление газа на входе в колонку
1500-2150 мм рт. ст. Газопоток — в диапазоне от 30 до 120 мл/мин.

В связи с тем что до настоящего времени еще не удалось добиться
разделения кортикостероидов глюко- и минералокортикоидного ряда, эстрогенов и
андрогенов на одной колонке (при одних и тех же способах предварительной
обработки биологического материала и условиях хроматографического анализа),
нами метод тонкослойной хроматографии использовался для разделения стероидного
экстракта на зоны: например, одна зона — зона эстрогенов, другая зона — зона
кортикостероидов, сознательно избегая деления смеси на отдельные вещества,
пользуясь для этого системами растворителей эфир-гексан,  и бензол-метанол

Оставить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *